CAS号 | EC号 | MDL编号 | 货号 |
9025-65-4 | 3.1.30.2(BRENDA，IUBMB) | MFCD00131010 | GA01.01/02/03/04 |
说明
贝融生物生产的全能核酸酶BETAGENE®-ProNuclease是来源于Serratia Marcescen（粘质沙雷氏菌）的非特异性核酸内切酶，可在链内任意核苷酸间进行切割，将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸，能够在非常广泛的条件下降解各种形式的（双链，单链，线状，环状，天然或变性）DNA和RNA，广泛用于去除生物制品中的核酸。
本品经基因工程改造在E.coli中表达纯化，分子量为30 kDa，纯度≥99%（SDS-PAGE、HPLC），比活 ≥ 1500000U/mg，蛋白酶活 > 250U/μL，内毒素<0.01 EU/kU。
产品特点
去除疫苗类产品中的外源性核酸、基因药物中病毒载体的核酸残留,提高产品安全性；
降低核酸引起的料液粘度,缩短处理时间，提高后续纯化过程的效率和终产品终收率；
去除缠绕在各类颗粒表面的核酸，有利于颗粒中目标充分的释放和纯化；
生物基因重组蛋白(如∶包涵体的处理)，提高复性后可溶性包涵体的回收率；
ELISA、柱层析、二维电泳和印迹分析的样品准备，经核酸酶处理后可明显提高分辨率和回收率。
核酸酶残留的去除
核酸酶也是一种蛋白质，如果加入到细菌或者细胞裂解液中，将会随着纯化步骤如其他杂蛋白一样被去除，如果加入到病毒或者病毒类疫苗中，由于核酸酶和病毒的分子量差异巨大，可以采用凝胶过滤的方式如sepharose6FF去除，核酸酶的残留量可以采用商品化的试剂盒进行检测。
1个单位（U）的定义：在pH 8.0、2.625 ml反应体积、37 °C条件下，在30分钟内使ΔA260吸收值吸收值变化 1.0（相当于完全消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）。
用于科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液的粘度，提高蛋白纯化效率及功能研究，并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞(PBMC)的结团。广泛用于去除生物制品中的核酸。
本品储存于缓冲液（20 mM Tris-HCl （pH 8.0），2 mM MgCl2，20 mM NaCl，and 50% Glycerol）。
酶的最佳作用条件是pH 为 8.0 - 9.2，37 °C半小时。超出这个范围酶仍然有活性，只是要适当延长作用时间；
镁离子对酶的活性是必须的，推荐使用的浓度为2 mM，如果样品中有EDTA等金属螯合剂，需要去除，或者加入过量的镁离子来中和EDTA；
酶的活性比较稳定，室温放置短期内不会有太多影响，长时间保存须放置在-20°C冰箱内，由于保护液中含有50%甘油，所以酶液不会冻结，酶被稀释后尽快用掉，避免反复冻融 。
质量标准
| 检测项目 | 标准 | 方法 |
外观 | 无色澄清透明 | 目测 |
鉴别 | 阳性 | 中国药典2020版 通则（3401） |
宿主蛋白残留 | ≤ 0.005% | 中国药典2020版 通则（0731） |
可见异物 | 无颗粒 | 中国药典2020版 通则（0904） |
pH值 | 7.0 - 9.0 | 中国药典2020版 通则（0631） |
酶活 | ≥ 250kU/mL | 在37℃，pH8的反应条件，2.625mL的反应体系中，在30分钟内使ΔA260吸收值变化1.0（完全消化37μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为1个酶活单位（U） |
纯度 | ≥ 99% | 中国药典2020版 通则（0541）、 SEC-HPLC法 |
蛋白酶活性 | 无活性 | 1 kU/ml 酶，与底物37℃ 孵育60 min |
内毒素 | ≤ 0.01 EU/kU | 中国药典2020版 通则（1143） |
微生物 | 不得检出 | 中国药典2020版 通则（1101） |
病原体 | 阴性 | 中国药典2020版 通则（3306） |
支原体 | 阴性 | 支原体检测试剂盒，PCR法 |
重金属残留 | ≤ 10 ppm | 中国药典2020版 通则（0821） |
外观：无色澄清透明 |
目测 |
鉴别：阳性 |
中国药典2020版 通则（3401） |
宿主蛋白残留 ≤ 0.005% |
中国药典2020版 通则（0731） |
pH值 ：7.0 - 9.0 |
中国药典2020版 通则（0631） |
酶活 ≥ 250kU/mL |
在37℃，pH8的反应条件，2.625mL的反应体系中，在30分钟内使ΔA260吸收值变化 1.0（完全消化37μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为1个酶活单位（U） |
纯度 ≥ 99% |
中国药典2020版 通则（0541）、 SEC-HPLC法 |
蛋白酶活性：无活性 |
1 kU/ml 酶，与底物37℃ 孵育60 min |
内毒素 ≤ 0.01 EU/kU |
中国药典2020版 通则（1143） |
微生物：不得检出 |
中国药典2020版 通则（1101） |
病原体：阴性 |
中国药典2020版 通则（3306） |
| 支原体：阴性 |
支原体检测试剂盒，PCR法 |
重金属残留 ≤ 10 ppm |
中国药典2020版 通则（0821） |
储存分类代码 | WGK | 闪电（F) |
10-Combustible liquids | WGK 1 | Not Applicable |
闪电（C) | 个人防护装备 | |
Not Applicable | Eye shields, gloves | |
COMPOSITION E.COLI RECOMBINANT NUCLEASE | |
MOLECULE WEIGHT APPROX. 30kD | |
CAT.No GA01.01/GA01.02 | APPEARENCE COLORLESS |
ENDOTOXINES < 0.01 EU/kU | PROTEASE NEGATIVE |
PURITY > 95 % BY SDS-PAGE. > 95 % BY HPLC | |
ACTIVITY ≥ 250 kU/mL，DNA; pH 8.0；30MIN; 37℃ | |
SPECS. ACTIVITY 1.5 X 106 kU/mL；CALCULATED ON PROTEIN | |
AA SEQUENCE ADTLESIDNCAVGCPTGGSSNVSIVRHAYTLNNNSTTKFANWVAYHITKDTPASGKTRNWKTDPALNPADTLAPADYTGANAALKVDRGHQAPLASLAGVSDWESLNYSNITPQKSDLNQGAWARLEDQERKLIDRADISSVYTVTGPLYERDMGKLPGTQKAHTIPSAYWKVIFINNSPAVNHYAAFLFDQNTPKGADFCQFRVTVDEIEKRTGLIIWAGLPDDVQASLKSKPGVLPELMGCKN | |
FORMULATION 20 mM TRIS-HCl (pH 8.0)，2 mM MgCL2，20 mM NaCL，50% GLYCEROL | |
USAGE FOR REASEARCH OR FURTHER MANUFACURE USE | |
STORAGE -20℃ | |
Specs
FAQs
1.5 x 106 kU/mL；calculated on protein
