CAS号 | EC号 |
9025-65-4 | 3.1.30.2(BRENDA，IUBMB) |
货号 | MDL编号 |
GCc.aC/GCc.bC/ GCc.cC | MFCD00131010 |
说明
羟基磷灰石，又称羟磷灰石，碱式磷酸钙，是钙磷灰石(Ca5(PO4)3(OH))的自然矿物化。但是经常被写成Ca10(PO4)6(OH)2的形式，以突出它是由两部分组成的–羟基与磷灰石。OH-羟基能被氟化物、氯化物和碳酸根离子代替，生成氟基磷灰石或氯基磷灰石，晶体状羟基磷灰石已经被广泛用于生物活性物的分析、制备及工业化生产。
由于晶体状羟基磷灰石的晶体结构强度的原因限制了其在工业化生产的流速和规模。20世纪80年代，科学家通过高温灼烧的手段得到更加坚固，多孔的羟基磷灰石材料，这使得羟基磷灰石材料在规模化工业生产中能够承受更高的流速和压力，极大的提高了生产的效率。这种经过高温处理的羟基磷灰石材料就是我们俗称为陶瓷型羟基磷灰石。现在陶瓷型羟基磷灰石已经被广泛地应用于生物大分子的纯化制备，重金属离子的吸附去除以及骨修复材料中。
作用机制
羟基磷灰石包括两个结合位点：Ca2+和PO43-。这些结合位点按照其自有的晶体结构分布。PO43-离子与带正电的蛋白质以离子键结合，具有阳离子交换特性；其中的Ca2+离子与带负电蛋白质的自由羧基簇以金属螯合方式结合。
阳离子交换作用：当蛋白带正电荷时候，可以与PO43-结合，而与Ca2+是相互排斥，这种作用主要是阳离子交换作用。这种阳离子交换作用会受到洗脱缓冲液中的中性盐浓度（如NaCl）或者平衡液中磷酸盐浓度的影响。这种作用随着pH的增高也会相应减弱。因此，增加盐、磷酸盐的浓度或增高pH，都会减弱目的蛋白与PO43-之间的相互作用。
钙金属螯合作用：Ca2+可以与蛋白或其他分子（如核酸）表面的羧基簇或磷酸基团发生金属螯合作用，而同时与PO43-相排斥。这种结合方式作用力是一般离子交换的15-60倍。所以这种结合方式受离子的影响比较小，对NaCl不敏感。而且这种作用力随着离子强度会增加钙金属螯合力，原因是由于离子强度的增加屏蔽了分子表面功能基团与PO43-之间的相互排斥作用。这种结合方式可以通过磷酸钠进行洗脱。
说明
羟基磷灰石，又称羟磷灰石，碱式磷酸钙，是钙磷灰石(Ca5(PO4)3(OH))的自然矿物化。但是经常被写成Ca10(PO4)6(OH)2的形式，以突出它是由两部分组成的–羟基与磷灰石。OH-羟基能被氟化物、氯化物和碳酸根离子代替，生成氟基磷灰石或氯基磷灰石，晶体状羟基磷灰石已经被广泛用于生物活性物的分析、制备及工业化生产。
由于晶体状羟基磷灰石的晶体结构强度的原因限制了其在工业化生产的流速和规模。20世纪80年代，科学家通过高温灼烧的手段得到更加坚固，多孔的羟基磷灰石材料，这使得羟基磷灰石材料在规模化工业生产中能够承受更高的流速和压力，极大的提高了生产的效率。这种经过高温处理的羟基磷灰石材料就是我们俗称为陶瓷型羟基磷灰石。现在陶瓷型羟基磷灰石已经被广泛地应用于生物大分子的纯化制备，重金属离子的吸附去除以及骨修复材料中。
作用机制
羟基磷灰石包括两个结合位点：Ca2+和PO43-。这些结合位点按照其自有的晶体结构分布。PO43-离子与带正电的蛋白质以离子键结合，具有阳离子交换特性；其中的Ca2+离子与带负电蛋白质的自由羧基簇以金属螯合方式结合。
阳离子交换作用：当蛋白带正电荷时候，可以与PO43-结合，而与Ca2+是相互排斥，这种作用主要是阳离子交换作用。这种阳离子交换作用会受到洗脱缓冲液中的中性盐浓度（如NaCl）或者平衡液中磷酸盐浓度的影响。这种作用随着pH的增高也会相应减弱。因此，增加盐、磷酸盐的浓度或增高pH，都会减弱目的蛋白与PO43-之间的相互作用。
钙金属螯合作用：Ca2+可以与蛋白或其他分子（如核酸）表面的羧基簇或磷酸基团发生金属螯合作用，而同时与PO43-相排斥。这种结合方式作用力是一般离子交换的15-60倍。所以这种结合方式受离子的影响比较小，对NaCl不敏感。而且这种作用力随着离子强度会增加钙金属螯合力，原因是由于离子强度的增加屏蔽了分子表面功能基团与PO43-之间的相互排斥作用。这种结合方式可以通过磷酸钠进行洗脱。
再利用
需要用 500mM 中性磷酸盐或磷酸钾溶液或 400mM 磷酸三钠（pH 11 - 12） 清洗 3 - 5CV 完成再生。柱子也可以用包含 5mM 磷酸根中性1-2M KCl、NaCl、6M 尿素或 8M 盐酸胍清洗柱子。
贮藏
未开启使用的 BG-CHT 可以在室温保存。一旦浸润，需要在0.1M NaOH、室温保存。如果使用低于100mM NaOH，请添加 10mM 磷酸盐。使用过的 CHT，需要再生和灭菌之后，用不高于 1M NaOH，室温，避免阳光直射保存。
灭菌
柱子可以用浓度至 2M NaOH 消毒，也可以贮藏在 0.1-1M NaOH。
质量标准
| 检测项目 | 标准 | 方法 |
外观 | 白色粉末 | 目测 |
阳性 | 中国药典2020版 通则（3401） | |
宿主蛋白残留 | ≤ 0.005% | 中国药典2020版 通则（0731） |
可见异物 | 无颗粒 | 中国药典2020版 通则（0904） |
pH值 | 7.0 - 9.0 | 中国药典2020版 通则（0631） |
酶活 | ≥ 250kU/mL | 在37℃，pH8的反应条件，2.625mL的反应体系中，在30分钟内使ΔA260吸收值变化1.0（完全消化37μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为1个酶活单位（U） |
纯度 | ≥ 99% | 中国药典2020版 通则（0541）、 SEC-HPLC法 |
蛋白酶活性 | 无活性 | 1 kU/ml 酶，与底物37℃ 孵育60 min |
内毒素 | ≤ 0.01 EU/kU | 中国药典2020版 通则（1143） |
微生物 | 不得检出 | 中国药典2020版 通则（1101） |
病原体 | 阴性 | 中国药典2020版 通则（3306） |
支原体 | 阴性 | 支原体检测试剂盒，PCR法 |
重金属残留 | ≤ 10 ppm | 中国药典2020版 通则（0821） |
储存分类代码 | WGK | 闪电（F) |
10-Combustible liquids | WGK 1 | Not Applicable |
闪电（C) | 个人防护装备 | |
Not Applicable | Eye shields, gloves | |
COMPOSITION HYDROXYAPATITE | |
PARTICLE SIZE（D50） 20/40/60 μM | |
CAT.No GCc.a/GCc.b/GCc.c | APPEARENCE WHITE FREE FLOWING POWDER |
TAPPED DENSITY 0.6-0.9 g/mL | FUNCTIONAL GROUPS Ca+，PO-，OH |
pH STABILITY 6.5 - 14 | BASE STABILITY > 1 YEAR IN 1 N NaOH |
DYNAMIC BINDING ASSAY TYPE I：25 - 60 mg LYSOZYME；TYPE II：15 - 25 mg LYSOZYME | |
REGENERATION 0.4 M SODIUM PHOSPHATE，pH 7-7.5；1 M TRISODIUM PHOSPHATE，pH 11-12 | |
AUTOCLAVABILITY（BULK） 121°C，20 MIN IN PHOSPHATE BUFFER，pH 7 | |
TYPICAL LINEAR FLOW RATE 50-1000 CM/HR | |
产品信息
使用须知
产品型号
Ca+，PO-，OH
我们提供三种粒径（20µm、40µm和60μm）的 I 型、 II 型和III型的陶瓷型羟基磷灰石填料。I 型陶瓷型羟基磷灰石为400℃温度下充分烧结的均匀球形颗粒，II 型陶瓷型羟基磷灰石700℃温度下充分烧结的均匀球形颗粒，III型是烧结温度更高的微球。
I 型和 II 型陶瓷型羟基磷灰石本质上都是羟基磷灰石，两种类型的陶瓷型羟基磷灰石的结合和洗脱特征和晶体羟基磷灰石类似，但是在三个方面有比较明显的差异：I 型的蛋白载量高，且对酸性蛋白载量更高。II 型的蛋白载量较低，对早期洗脱蛋白以及核酸的分辨率较佳。由于II型对白蛋白的亲和力很低，它通常比I型更适于纯化多种类的免疫球蛋白。
在我们的实测中，I 型对鼠单抗的满载量为45-60mg/mL，II 型对兔多抗的满载量为40-55mg/mL。III 型对一些特定蛋白的挂载非常有效，详情请咨询我们的销售支持。